تکنیک آزمایشگاهی کاریوتیپ خون(قسمت دوم)

مراحل انجام آزمایش کاریوتیپ خون:

این مراحل شامل؛

• کشت نمونه خون محیطی
• هاورستیا مرحله ی انجام برداشت
• لام گیری
• بندینگG

1. اولین مرحله، کشت سلول محسوب میشود،که در این مرحله تعداد سلول های نمونه را افزایش میدهیم.برای افزایش سلول ها میتوان از میتوژن ها که سلول هارا تحریک به تقسیم میکنند،استفاده میکنیم
2. آماده کردن نمونه ها؛فراوان ترین نمونه بافتی در موارد زیاد برای انجام این اعمال بالینی «نمونه خون محیطی»می باشد.واین نمونه را میتوان به راحتی از تمامی سنین دریافت کرد.
3. روش خون گیری:
   ابتدا برای اینکه سلول های خونی تحریک شوند،ازفاکتور های پروتئینی وویروسی استفاده میشود.
   از مواردی که برای تحریک سلول ها مورد استفاده قرار میگیردمیتوان به Phytohemagglutinin(PHA)
   Barr_EpsteniViruse(EBV)
   اشاره کرد.
   ونمونه خون محیطی بایک سرنگ هپارین«ml 2_5»از بیمارگرفته میشود.
4. سلول هایTتحت تاثیرPHA تحریک میشود.
   وسلول های Bبه طور اختصاصی توسطEBVتحریک میشود.سلول هایBیا لنفوستBجز سیستم ایمنی بدن هستندوهمچنین میتوانند باایمنی سلولی مکانیسم دفاع اختصاصی نیز داشته باشند،این سلول ها در مقابل عوامل خارجی وپاتوژن هایی از قبیل ویروس ها پادتن تولید می کنند.
5. از چه نمونه خونی برای کاریوتیپ باید استفاده شود
   نمونه خونی مورد استفاده در آزمایشات نباید لخته شود برای این منظور از هپارین که ماده ضد انعقاد خون است در مواقع خونگیری استفاده میشود.
   منبع مصرف هپارین دربیماران مبتلا به هموفیلی وسایر اختلالات خونی ازجمله فشارخون زیادوشدید،آنوریسم ونارسایی کلیه مشاهده میشود.
6. از چه نمونه های خونی نباید برای کاریوتیپ استفاده کرد:
   1)نمونه هایی که بیش از
   « 72»ساعت باقی مانده.
   2)نمونه هایی که دردمای بالا قرار گرفته باشند.
   3)نمونه هایی که درماده ضد انعقاد اشتباه مثلEDTAجمع آوری شده باشند.
   4)نمونه های یخ زده.(اما نمونه خونی را میتوان به مدت یک هفته در قسمت پایین یخچال نگهداری کرد.)
7. موارد موردنیاز برای تهیه محیط کشت سلول های خونی شامل؛ال_گاوتا مین،فیتوهماگلوتینین«از گلبول های قرمز استخراج میشودوموجب تقسیم گلبول هاب سفیدخون میشود»،پنی سیلین یا استرپتومایسین،سرمFBS
8. روش کشت خون:
   1)محیط کشت تهیه شده را به اندازه ی 5mlبه لوله ی استریل وارد میکنیم،وبعد خون را اضافه میکنیم.
   2)محتویات داخل لوله را مخلوط میکنیم برای جلوگیری از لخته شدن وبه صورت مایل دراتو انکوبه بادمای 37درجه قرارمیدهیم،ومدت زمان لازم 72ساعت می باشد.  3)بعدمدت زمان داده شده به کشت خونی هاورست را انجام میدهیم.(هاورست یا مرحله ی انجام برداشت خودشامل دو گام است،گام اول میتوزومتوقف کردن و گام دوم از بین بردنRBCها بااستفاده از محلول هایپوتونیک میباشد.)
9. مدت زمان قرار گیری کشت خونی در اتو انکوبه باتوجه به نمونه خونی متفاوت خواهد بود،برای مثال دربیماران مبتلا به کم خونی فانکونس که چرخه سلولی کند دارند،این مدت زمان به چهار روز افزایش پیدا میکندوبعد مرحله ی هاورست انجام میگیرد.

گرد آورنده:ماندانا ابراهیم زاده