وسترن بلاتینگ

وسترن بلاتینگ که همچنین به ایمونوبلاتینگ یا پروتئین بلاتینگ نیز معروف است،یکی از تکنیک های مهم در زیست شناسی سلولی و مولکولی می باشد.
از این روش برای تشخیص اختصاصی، حضور یا عدم حضور پروتئینی خاص در یک ترکیب استفاده می شود. همچنین از طریق سایز و شدت رنگ شکل گرفته بر روی غشاء بلات ، می توان ارزیابی نیمه کیفی از پروتئین مورد نظر را داشت.
تکنیک وسترن بلات همچنین برای تایید پروتئین تولید شده پس از کلونینگ نیز مورد استفاده قرار می گیرد.

فرایند این تست شامل ۳ فاکتور اصلی است:

1_جداسازی کل پروتئین ها بر اساس اندازه با استفاده از الکتروفورز پروتئین در ژل

2-انتقال پروتئین های جدا شده به یک بستر جامد

3-شناسایی اختصاصی پروتئین هدف با آنتی بادی مناسب

روش اجرا

در تکنیک وسترن بلات از ژل الکتروفورز برای جداسازی پروتئین ها بر اساس سایز و طول استفاده می گردد. پس از جداسازی پروتئین ها، براساس سایز و طول رشته پلی پپتیدی، آن هارا به یک غشاء نیتروسلولزی منتقل کرده و جهت مشاهده آن ها از روش های immunostainning استفاده می کنند.
در روش وسترن بلات ،برای جداسازی پروتئین ها معمولا از SDS_PAGE استفاده می شود. از SDS به این دلیل استفاده می شود که به همه پروتئین ها بار منفی دهد تا پروتئین ها فقط بر اساس سایز و اندازه جدا شوند .
پس از جداسازی پروتئین ها، آن ها را به یک غشاء نیتروسلولزی جهت حذف اتصالات غیر اختصاصی انتقال می دهند.
در مرحله بعد، نمونه مورد نظر با آنتی بادی اختصاصی پروتئین هدف، رنگ آمیزی می شود؛ در نهایت غشاء با آنتی بادی ثانویه که به آنتی بادی اولیه متصل می شود رنگ آمیزی می شود.

برخی از کاربرد ها در تشخیص و آزمایشگاه

1_تایید حضور ویروسHIV
2_تشخیص BSE یا بیماری جنون گاوی
3_تشخیص تولارمی( تب خرگوش )
4_برخی از اشکال بیماری لایم
5_تاییدیه هپاتیت B
6_تاییدیه هرپس ویروس-2 HSV2

یک نقطه ضعف وسترن بلات (ایمونوبلوت) این است که وقت گیر است و از نظر تجربه آزمایش کننده تقاضای زیادی دارد. علاوه بر این ، به بهینه سازی شرایط آزمایشی (به عنوان مثال جداسازی پروتئین ، بافرها ، نوع جداسازی ، غلظت ژل و …) نیاز دارد.

انواع مختلفی و روشهای مختلفی برای وسترن بلات وجود دارد و موضوعات و کاربردهای بسیار متفاوتی را پوشش می دهد.

آیا تجربه آزمایش با تکنیک وسترن بلات را داشته اید؟ به نظر شما تفاوت بین وسترن بلات با روش های جاذب سیستم ایمنی مانند ELISA  در چیست؟ نظرات و تجربیات خود را با ما به اشتراک بگذارید.

گرد اورنده:مریم درخشانیان

منبع

https://www.labworld.ir/%D9%85%D8%B7%D8%A7%D9%84%D8%A8/%D8%B2%DB%8C%D8%B3%D8%AA-%D9%81%D9%86%D8%A7%D9%88%D8%B1%DB%8C/item/59-%D8%AA%DA%A9%D9%86%DB%8C%DA%A9-%D9%85%D9%88%D9%84%DA%A9%D9%88%D9%84%DB%8C-%D9%88%D8%B3%D8%AA%D8%B1%D9%86-%D8%A8%D9%84%D8%A7%D8%AA.html