تکنیک های آزمایشگاهی

آزمایش آنتی استرپتولیسین O (تست تیتر ASO)

بررسی و تفسیر تست تیتر ASO

مقدمه

هنگامی که بدن با باکتری­ ها­ی مضر تماس پیدا می­ کند، برای دفاع از خود آنتی­­ بادی تولید می­کند. آنتی­ بادی­ ها، پروتئین­ های دفاعی تخصصی هستند که توسط سیستم ایمنی هنگام تشخیص عوامل بیگانه مهاجم همانند باکتری ­ها تولید می­ شوند.

تیتر ASO آزمایشی است که برای تشخیص عفونت باکتریایی استرپتوکوک گروه A انجام می­ شود. این آزمایش خون برای اندازه گیری آنتی­ بادی است که بدن در مقابله با این باکتری تولید می­ کند. ASO و  Anti-DNAse متداول­ترین آنتی ­بادی­ ها­یی هستند که بدن در پاسخ به عفونت استرپتوکوک گروه  A تولید می­ کند.

آنتی­ بادی ­ها علیه محصول خارج سلولی پروتئینی باکتری بنام استرپتولایسین O ساخته می­شوند. استرپتولایسین O که اکسیژن ناپایداری است، توکسینی ترشح می­کند که خاصیت سیتولیتیک دارد و طی فرایندی باعث ایجاد سوراخ­ هایی در غشای سلول و لیز گلبول قرمز می­شود به همین دلیل از گلبول قرمز به عنوان شاهد آزمایش استفاده می­شود.

 باکتری استرپتوکوک منجر به چه بیماری­ هایی می­شود؟

اگرچه عفونت­ های استرپتوکوکی با آنتی بیوتیک­ های از بین برنده عفونت شناسایی و کنترل می ­شوند اما درصورت درمان نشدن یا تاخیر در درمان با عارضه­ ها­یی همراه است:

  • عفونت کلیوی یا گلومرولونفریت که اغلب باعث ادم، کدر شدن و کاهش دفع ادرار همچنین ادرار خونین می ­شود.
  • تب حاد روماتیسمی که بر مفاصل، قلب و استخوان­ ها تاثیر می­گذارد، این تب با علائم گلودرد، تنگی نفس، خستگی و درد قفسه سینه همراه است.
  • اندوکاردیت باکتریایی که پوشش داخلی قلب را آلوده می ­کند.
  • اسکارلت، به ضایعات پوستی که معمولا با خارش و سرخی پوست همراه است، می­ گویند.
  • فارنژیت، تب مخملک و آمپتیگو (در میان کودکان بیشتر رایج است بدلیل استفاده از اسباب بازی ­های مشترک)
  • التهاب گوش میانی
  • تب زایمان
  • همچنین باعث سلولیت یا necrotizing fasciitis می­ شود.

در بیماران بدون علامت این بیماری­ ها اصولا با یک دوره تاخیر خود را نشان می ­دهند. دوره تاخیر برای بیماری گلومرولونفریت تقریبا 10 روز و برای تب روماتیسمی دوره تاخیر 20 روز است، این تب  اغلب در کودکان 5 الی 15 سال رخ می­دهد.

چگونه فرد برای آزمایش ASO آماده می­شود؟

برای آزمایش ASO نمونه خون احتیاج است. نمونه خون از ورید بازو یا دست گرفته می­ شود. با دستور پزشک در صورت لزوم باید 6 ساعت قبل آزمایش ناشتا بود. مدت زمان این آزمایش تقریبا 10 دقیقه است.

خطرات ناشی از انجام این آزمایش چیست؟

خطرات انجام این آزمایش بسیار کم است. ممکن است گاهی یک یا چند سوزن نیاز باش که باعث مقداری درد در بیمار شود. همچنین ممکن است سبب:

  • خونریزی بیش از حد در محل سوزن
  • تجمع خون در زیر پوست
  • عفونت و کبودی

روش های اندازه­گیری ASO

1- روش Rapid یا غربالگری: در این روش ذرات لاتکس حساس شده با استرپتولایسین O روی لام در برخورد با سرم دارای ASO آگلوتینه می­شود و پس از آن باید تیتر آن را مشخص کنیم اگر آگلوتیناسیون مشاهده نشد تست منفی است. برای انجام این تست هیچ نیازی به رقیق کردن سرم نداریم.

2- روش لوله ه­ای که روش استاندارد است: آزمایش ASO بر اساس آزمایش­ های خنثی سازی آنزیم است. ابتدا رقت­ های سرمی100/1 (1/0  سی سی سرم + 9/9 سی سی بافرASO) و 500/1 (4 سی سی از بافر ASO +1 سی سی از رقت 100/1) و سوسپانسیون5% گلبول قرمز، بافر ASO و استرپتولایسین O تهیه می­کنیم. (باید تمامی مقادیر طبق بروشور کیت مصرفی باشد) سپس طبق جدول بالا عمل می­کنیم. اگر سرم فرد ASO نداشته باشد سبب همولیز گلبول قرمز می ­شود. بنابراین هرچه میزان ASO در سرم بیشتر باشد سبب ممانعت لیز گلبول قرمز می ­شود.

تفسیر نتایج آزمایش

اگر نتایج آزمایش نشان دهنده ASO بالا باشد ممکن است بیمار دارای عارضه پس از استرپتوکوک باشد. بیش از 80% بیماران مبتلا به تب روماتیسمی و 95% بیماران به گلومرولونفریت حاد ASO بالایی دارند.

اگر نتیجه آزمایش منفی باشد به معنای عدم وجود عفونت استرپتوکوک است اما در صورتی که پزشک به نتایج آزمایش شک کند برای تایید تشخیص، ممکن است طی 10 الی 14 روز آزمایش دیگری تجویز کند زیرا بدن طی یک هفته پس از عفونت آنتی­ بادی تولید می­کند.

دامنه های مقدار طبیعی نتیجه آزمایش بدلیل فاکتور­های مختلفی نظیر سن بیمار، شدت عفونت، نوع آزمایشگاه و … متفاوت است اما در حالت کلی مقدار زیر 200 تاد طبیعی تلقی می­ شود و دامنه طبیعی برای کودکان زیر 100 تاد است. تیتر ASO در نوزادان بستگی به تیتر ASO مادر دارد. بعد از 8 ماهگی تیتر ASO افزایش می­ یابد.

تیتر آنتی­بادی بر ضد استرپتولایسین O را با واحد تاد (Todd) یا واحد بین المللی (IU) بیان میکنند. واحد تاد عبارتست از بالاترین رقت سرم که مانع همولیز گلبول قرمز توسط استرپتولایسین O می ­شود.

نکات لازم برای گرفتن و نگهداری نمونه

سرم یا پلاسمای جداشده نباید بیش از 8 ساعت در دمای اتاق باقی بماند، اگر در این مدت سنجش انجام نگیرد سرم یا پلاسما در دمای +2 سانتی گراد تا +8 سانتی گراد نگهداری می­شود و اگر سنجش نمونه در طول 48 ساعت کامل نشد یا نمونه در این مدت ذخیره نشد باید در دمای -15 سانتی گراد تا -20 سانتی گراد فریز شود. حساسیت این آزمایش می ­تواند در دماهای پایین کاهش پیدا کند. برای استفاده از نمونه­ ی فریز شده باید توسط ورتکس، همگن شود. سرمی که به عنوان نمونه مورد سنجش قرار می­گیرد حتما باید تازه باشد. نمونه همولیزه بدلیل نتایج کاذب مورد قبول نیست. نمونه باید فاقد هرگونه رشته­ های فیبرین باشد.

تست آنتی استرپتولیسین O

آیا همراه این آزمایش، برای تایید بهتر بیماری­ ها آزمایشات دیگری لازم است؟

در صورت مبتلا شدن به تب روماتیسمی، ممکن است آزمایش­­ ها­ی دیگر آنتی­­بادی که شامل آنتی هیالورونیداز و ضد  DNase Bنیز انجام گیرد و اگر عفونت توسط بدن پخش شود برای اطمینان بیشتر به کشت خون و نمونه گیری از برخی بافت­ها یا بلغم در ریه (خلط) لازم است. ممکن است بدلیل وجود استرپتوکوک­­­ها ی بتاهمولیتیک گروه A به کشت گلو هم نیاز باشد.

عوامل موثر بر نتایج این آزمایش

اگر زمان کافی برای تجمع آنتی ­بادی در خون نباشد، نتیجه آزمایش در صورت عفونت، منفی کاذب گزارش داده می­شود. بنابراین زمان بندی در انجام این آزمایش امری مهم است. برخی مواقع زمان لازم برای به اوج رسیدن آنتی بادی در بدن 4 الی 5 هفته است. آلودگی سرم بیمار از دیگر عوامل تاثیرگذار بر نتایج آزمایش است.

در چه صورتی تیترASO کاهش می­یابد؟

  • مصرف داروهایی نظیر برخی آنتی­ بیوتیک­ها و کورتیکواستروئید­ها باعث کاهش سطح آنتی ­بادی می­ شود و تولید  ASOرا سرکوب می­کنند.
  • در سندروم نفروتیک بدلیل کاهش سنتز آنتی­ بادی
  • افراد مسن

آیا مصرف دارو­های خانگی می­تواند بر روند درمان تاثیر بگذارد؟

تحقیقات نشان  می­دهد که روغن پونه کوهی و سیر موثرترین آنتی بیوتیک ­های طبیعی هستند. غرغره با نمک هیمالیا نیز می­تواند باکتری­های موجود در دهان را از بین ببرد و موثر بر تسکین گلو درد باشد.

نتیجه گیری

این آزمایش به طور معمول انجام نمی­شود فقط در صورتی که وجود علائم در بیمار نشان دهد عارضه ای ایجاد شده انجام می­گیرد. تست  ASO نسبت به Anti-DNase B از حساسیت کمتری برخوردار است، همچنین این تست شدت بیماری را پیش بینی نمی کند. درصد میزان منفی کاذب در بیماران 20-30% است، موارد مثبت کاذب نیز می­تواند بدلیل بیماری سل و کبد باشد.

اکثر بیماران تیتر ASOآن­ها بین 300 الی 500 تاد است و در صورت حاد بودن بیماری ممکن است به 1000 تاد نیز برسد. در بیشتر موارد برای بیمارانی که سطح تیتر ASO بالایی دارند بدلیل ریسک آلرژی کمتر، پنی سیلین تجویز می­شود، اگر در بیماران مبتلا به تب روماتیسمی تخریب شدید دیواره و دریچه قلب اتفاق بیفتد متاسفانه بهبودی کامل امکان پذیر نیست.

نویسنده: مطهره تقی پور

دیدگاهتان را بنویسید

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد. بخش‌های موردنیاز علامت‌گذاری شده‌اند *

دکمه بازگشت به بالا