فهرست مطالب
شمارش سلولها نیازمند روش عمومی استفاده از اتاقکهای شمارش کننده به نام هموسایتومتر میباشد. اولین بار این ابزار به وسیله یک آناتومیست فرانسوی در قرن 19 ، به نام Luois-Charles Malassez برای شمارش سلولهای خون ابداع شد.
هموسایتومتر
یک لام است که برای شمارش تعداد سلولها از آن استفاده میشود. این لام دارای شبکهای از مربعهای هاشور خورده در وسط است که این شبکه قطر مشخصی دارد وشمارش سلولها ناحیه پوشیده شده بوسیله خطوط مشخص شده است، در نتیجه شمارش سلولها در حجم مشخصی از محلول امکان پذیر میشود. معمول ترین نوع هموسایتومتر دارای دو چاهک H برای قرار دادن نمونه استکه هر چاهک از 9 مربع تشکیل شده است.
شرح کار تکنیک هموسایتومتری
برای کار با هموسایتومتر لازم است به میزان کافی از نمونه را با رنگ تریپان بلو ترکیب کنیم که این رنگها به ما کمک میکند که سلولهای زنده ومرده را از هم تشخیص بدهیم چون رنگ از غشای سلولهای مرده عبور میکند و این سلولها رنگ را جذب میکنند؛ در نتیجه ما سلولهای مرده را آبی رنگ میبینیم در حالی که سلول زنده شفاف دیده میشود. سپس مقدار مشخصی از محلول بدست آمده را در قسمت چاهک هموسایتومتر قرار میدهیم وبعد هموسایتومتر را زیر میکروسکوپ میگذاریم.
نکته مهم:
قبل از شروع کار باید هموسایتومتر و لاملی که روی آن قرار میگیرد با استفاده از یک کاغذ تمیز کننده لنز کاملا عاری از هر نوع غبار و ذره ای باشند. و لاملی که به کار میرود باید ضخیم تر از لاملهای معمول بکار رفته در سنجشهای میکروسکوپی باشد تا بتواند بر کشش سطحی یک قطره مایع غلبه کند.
شمارش سلولها در هموسایتومتر:
یک شبکه کامل در هموسایتومتر شامل 9 مربع است که هر کدام 1میلی متر مربع میباشد.
ناحیه شمارش مرکزی هموسایتومتر شامل 25 مربع بزرگ وهر مربع بزرگ دارای 16 مربع کوچکتر است که در تصویر مشاهده میشود. هنگامی که شمارش را انجام میدهیم تنها سلولهایی را که بر روی خطوط دو لامل قرار گرفته بر روی مربع های بزرگ هستند را شمارش میکنیم تا از شمارش دوباره سلولها اجتناب شود. محلول ها هم باید به میزانی رقیق شوند که هر سلول یا هر ذرهای که شمارش میشود بر روی هم قرار نگیرند و به صورت یکسانی پخش شده باشند.
نتیجه
هر چند که امروزه برای شمارش اجزای سلولی از دستگاههای به روز استفاده میشود اما هموسایتومتری همچنان در آزمایشگاهها پرطرفدار است و کمکهای شایانی به زیست شناسان و محققان کردهاست.
نویسنده:مینا بهنام فرد
منابع:
Bionet
@sabio.lab
M.youtube.com