تکنیک های آزمایشگاهی

تکنیک هموسایتومتری

شمارش سلول­ها نیازمند روش عمومی استفاده از اتاقک­های شمارش کننده به نام هموسایتومتر می­باشد. اولین بار این ابزار به وسیله یک آناتومیست فرانسوی در قرن 19 ، به نام Luois-Charles Malassez برای شمارش سلول­های خون ابداع شد.

هموسایتومتر

یک لام است که برای شمارش تعداد سلول­­ها از آن استفاده می­شود. این لام دارای شبکه­ای از مربع­های هاشور خورده در وسط است که این شبکه قطر مشخصی دارد وشمارش سلول­ها ناحیه پوشیده شده بوسیله خطوط مشخص شده است، در نتیجه شمارش سلول­ها در حجم مشخصی از محلول امکان پذیر می­شود. معمول ترین نوع هموسایتومتر دارای دو چاهک H برای قرار دادن نمونه استکه هر چاهک از 9 مربع تشکیل شده است.

یک شبکه کامل در هموسایتومتر شامل 9 مربع است که هر کدام 1میلی متر مربع می­باشد. ناحیه شمارش مرکزی هموسایتومتر شامل 25 مربع بزرگ وهر مربع بزرگ دارای 16 مربع کوچکتر است که در تصویر مشاهده می­شود. هنگامی که شمارش را انجام می­دهیم تنها سلول­هایی را که بر روی خطوط دو لامل قرار گرفته بر روی مربع ­های بزرگ هستند را شمارش می­کنیم تا از شمارش دوباره سلول­ها اجتناب شود. محلول ­ها هم باید به میزانی رقیق شوند که هر سلول یا هر ذره­ای که شمارش می­شود بر روی هم قرار نگیرند و به صورت یکسانی پخش شده باشند. تکنیک سایتومتری

شرح کار تکنیک هموسایتومتری

برای کار با هموسایتومتر لازم است به میزان کافی از نمونه را با رنگ تریپان بلو ترکیب کنیم که این رنگ­ها به ما کمک می­کند که سلول­های زنده ومرده را از هم تشخیص بدهیم چون رنگ از غشای سلول­های مرده عبور می­کند و این سلول­ها رنگ را جذب می­کنند؛ در نتیجه ما سلول­های مرده را آبی رنگ می­بینیم در حالی که سلول زنده شفاف دیده می­شود. سپس مقدار مشخصی از محلول بدست آمده را در قسمت چاهک هموسایتومتر قرار می­دهیم وبعد هموسایتومتر را زیر میکروسکوپ می­گذاریم.

نکته مهم

  قبل از شروع کار باید هموسایتومتر و لاملی که روی آن قرار می­گیرد با استفاده از یک کاغذ تمیز کننده لنز کاملا عاری از هر نوع غبار و ذره ای باشند. و لاملی که به کار می­رود باید ضخیم تر از لامل­های معمول بکار رفته در سنجش­های میکروسکوپی باشد تا بتواند بر کشش سطحی یک قطره مایع غلبه کند.

شمارش سلول­ها در هموسایتومتر:

یک شبکه کامل در هموسایتومتر شامل 9 مربع است که هر کدام 1میلی متر مربع می­باشد.

ناحیه شمارش مرکزی هموسایتومتر شامل 25 مربع بزرگ وهر مربع بزرگ دارای 16 مربع کوچکتر است که در تصویر مشاهده می­شود. هنگامی که شمارش را انجام می­دهیم تنها سلول­هایی را که بر روی خطوط دو لامل قرار گرفته بر روی مربع ­های بزرگ هستند را شمارش می­کنیم تا از شمارش دوباره سلول­ها اجتناب شود. محلول ­ها هم باید به میزانی رقیق شوند که هر سلول یا هر ذره­ای که شمارش می­شود بر روی هم قرار نگیرند و به صورت یکسانی پخش شده باشند.

نتیجه

هر چند که امروزه برای شمارش اجزای سلولی از دستگاه­های به روز استفاده می­شود اما هموسایتومتری همچنان در آزمایشگاه­ها پرطرفدار است و کمک­های شایانی به زیست شناسان و محققان کرده­است.

نویسنده:مینا بهنام فرد

منابع:

Bionet

@sabio.lab

M.youtube.com

www.researchgate.net

دیدگاهتان را بنویسید

نشانی ایمیل شما منتشر نخواهد شد. بخش‌های موردنیاز علامت‌گذاری شده‌اند *

دکمه بازگشت به بالا