توضیح آزمایش میلون و نکات مربوط به آن

تست میلون در تایید حضور آمینو اسید خاصی نقش دارد. اسید آمینه ها واحد ساختمانی پروتئین ها هستند که بیش از سیصد نوع آن در طبیعت و فقط بیست نوع آن در پروتیین انسانی یافت شده است.

اسیدهای آمینه در هنگام ساخته شدن پروتئین‌ها از   mRNA به یکدیگر می‌پیوندند. هر اسید آمینه، از یک کربن نامتقارن به نام کربن α تشکیل یافته ‌است که با چهار گروه مختلف کربوکسیل  (COOH)  اتم هیدروژن، گروه آمینی (NH₂) و یک زنجیره غیر جانبی (R-) پیوند برقرار می‌کند ؛ ریشه R ممکن است یک زنجیره کربنی یا یک حلقه کربنی باشد. عوامل دیگری مانند الکل، آمین، کربوکسیل و نیز گوگرد می‌توانند در ساختمان ریشه R شرکت کنند. زنجیره جانبی خود چندین اتم کربن دارد و آنها را به ترتیبی که از کربن آلفا، فاصله می‌گیرند، با حروف بتا (β) ، گاما (γ) و دلتا (δ) نشان می‌دهند. اگر در حالی که عامل COOH روی کربن آلفا قرار داد عامل NH₂ روی کربن‌هایی غیر آلفا قرار گیرد، نوع اسید آمینه به β،  γ یا δ تغییر خواهد کرد.

اسیدهای آمینه آزاد به مقدار بسیار ناچیز در سلول‌ها وجود دارند. بیشتر اسیدهای آمینه آلفا در سنتز پروتئین شرکت می‌کنند، در صورتی که اسیدهای آمینه بتا، گاما و دلتا واسطه‌های شیمیایی هستند.

بیشتر اسیدهای آمینه در pH هفت به صورت دو قطبی در می‌آیند یعنی گروه NH₂  پروتون می‌گیرد و گروه COOH هیدروژن خود را از دست می‌دهد و به صورت –COO- در می‌آید. زنجیره جانبی (گروه) R برای پروتئین‌ها می‌تواند یکی از ۲۰ حالت مختلف ممکن باشد و بدین ترتیب یک الفبای بیست حرفی برای ساخت پروتئین‌ها بوجود می‌آید. این بیست اسید آمینه می‌توانند با هر ترکیب و به هر تعداد در کنار هم آمده و به ساخت پروتئین منجر شوند.

طبقه بندی اسید های آمینه

1.بر اساس خواص فیزیکی و شیمیایی و قطبیت:

اسید آمینه خنثی

اسید آمینه باردار

2.بر اساس ریشه اسید آمینه:

اسید آمینه خطی (گلیسیرین و…)

اسید آمینه حلقوی (تیروزین و تریپتوفان و…)

تریپتوفان

تیروزین

روش های تشخیص افتراقی اسید آمینه

1.روش های شیمیایی

2.روش های فیزیکی که شامل کروماتوگرافی و الکتروفورز می باشد.

هدف این آزمایش

برای تشخیص آمینواسید تیروزین می باشد که دارای حلقه فنولی یا اگر این آمینواسید موجود باشد رنگ قرمز خوشرنگی به محلول می دهد. آمینواسید فنولی مثل تیروزین و مشتقات آن به این آزمایش پاسخ مثبت میدهند. ترکیبات با یک رادیکال هیدروکسی بنزن با معرف میلون واکنش میدهند و یک کمپلکس قرمز رنگ را ایجاد میکنند. معرف میلون محلول سولفات جیوه در اسید سولفوریک است.

روش کار

به 2 ميلي ليتر اسيد آمينه تيروزين 2 ميلي ليتر معرف ميلون اضافه نموده ولوله را به مدت   5-2  دقيقه  در بن  ماري جوش قراردهيد. سپس آن را زیر آب لوله گرفته و سرد میکنیم . سپس چند قطره اسید نیتریک بدان اضافه میکنیم .

نتیجه آزمایش میلون

محلول حاوی تیروزین و مشتقات آن که حلقه فنول دارند به این آزمایش پاسخ مثبت میدهند و یک حلقه قرمز رنگ در محلول ایجاد میشود.

نویسنده: راضیه شیرگر

منبع تصویر : Slideshare

همچنین بخوانید : توضیح روش و نکات تست فهلینگ (شناسایی قند احیا کننده)